1选择题
某生物工程公司利用动物体细胞核移植技术培育高产奶牛。已知信息：供体高产奶牛为雌性，其体细胞的细胞核基因型为 AaBb（两对基因独立遗传，A 控产奶量、B 控乳蛋白含量，均为完全显性）；受体为另一品种奶牛的去核卵母细胞，其细胞质中含有少量线粒体 DNA。获得的克隆雌性奶牛与一头基因型为 Aabb 的雄性奶牛杂交，后代中产奶量高且乳蛋白含量高的个体所占比例为（ ）
- A. 3/8
- B. 1/4
- C. 3/16
- D. 1/2
答案：A
解析：克隆奶牛的细胞核基因完全来自供体高产奶牛，基因型为 AaBb（细胞质基因来自受体卵母细胞，但不影响本题所问的核基因性状）。逐对分析：Aa × Aa，后代为高产（A_）的概率为 3/4；Bb × bb，后代乳蛋白含量高（Bb）的概率为 1/2。两对基因独立遗传，按乘法原理，所求概率为 3/4 × 1/2 = 3/8。易错点：一是误以为克隆动物的基因型与供体不同或与受体有关，实际核基因全部来自供体；二是把 Bb × bb 误算为 3/4 或 1/4；三是计算时漏乘，只算出 3/4 或 1/2 就作答。故选 A。
2选择题
某科研团队通过蛋白质工程改造一种工业用酶，以提高其在高温下的稳定性。改造思路为：预期蛋白质的功能→设计预期的氨基酸序列→推测应有的脱氧核苷酸序列→合成新的基因并表达。下列关于该过程及后续核移植应用的叙述，错误的是（ ）
- A. 蛋白质工程是在基因工程基础上发展起来的，其本质是改造或合成新的基因
- B. 与基因工程相比，蛋白质工程可以生产自然界中不存在的蛋白质
- C. 若直接改造该酶的氨基酸序列而不改变基因，改造后的性状可遗传给后代
- D. 若将改造后的基因导入供体动物体细胞核，再进行体细胞核移植，克隆动物与供体动物的核基因组成相同
答案：C
解析：蛋白质工程的流程是“逆向”思维：从预期功能出发，设计氨基酸序列，再推测对应的脱氧核苷酸序列（基因），最后合成并表达，故 A 正确。蛋白质工程可定向改造或创造自然界中不存在的蛋白质，B 正确。若只改造蛋白质（酶）的氨基酸序列而不改变基因，改变的是蛋白质本身，基因未变，该性状不能通过遗传物质传递给后代，C 错误。体细胞核移植中，克隆动物的核基因全部来自供体体细胞核，故其核基因组成与供体一致（细胞质基因来自受体去核卵母细胞），D 正确。易错点：一是把蛋白质工程误认为直接操作蛋白质；二是混淆“核基因相同”与“遗传物质完全相同”——后者因细胞质基因来自受体而不成立，但 D 仅限定核基因，故正确。本题选错误项，故选 C。
3选择题
某单基因遗传病由一对等位基因控制，人群中男性患者明显多于女性患者。已知信息：一对表现型正常的夫妇，生育了一个患该病的儿子和一个表现型正常的女儿；该正常女儿与一个表现型正常的男性婚配，生下一个患该病的儿子。不考虑基因突变，下列有关叙述正确的是（ ）
- A. 该病为常染色体隐性遗传病，正常女儿的基因型一定为杂合子
- B. 该病为伴 X 染色体隐性遗传病，正常女儿的基因型一定为杂合子
- C. 该病为伴 X 染色体隐性遗传病，正常女儿所生的正常儿子一定为携带者
- D. 该病为伴 X 染色体显性遗传病，正常女儿与正常男性婚配不会生出患病孩子
答案：B
解析：第一步，判断显隐性：表现型正常的双亲生出患病儿子，属于「无中生有」，故该病为隐性遗传病，排除 D（D 说显性，且显性病不会出现「无中生有」）。
第二步，判断基因位置：题干指出「人群中男性患者明显多于女性患者」，这是伴 X 染色体隐性遗传病的典型特点（男性只有一条 X 染色体，只要携带致病基因即患病），故最可能是伴 X 隐性遗传。设致病基因为 a。
第三步，确定基因型：正常夫妇的基因型为 XᴬY（父）× XᴬXᵃ（母，因其子 XᵃY 患病，致病基因必来自母亲），正常女儿的基因型为 XᴬXᴬ 或 XᴬXᵃ，但题干又给出「正常女儿与正常男性（XᴬY）婚配生下一个患该病儿子（XᵃY）」，该儿子的 Xᵃ 必来自母亲即正常女儿，因此正常女儿的基因型一定是 XᴬXᵃ（杂合子、携带者），故 A 错（「常染色体隐性」与「男性患者明显多于女性」的特征不符），B 正确。
第四步，分析 C：正常女儿（XᴬXᵃ）× 正常男性（XᴬY），其儿子基因型为 XᴬY（正常）或 XᵃY（患病），各占 1/2；正常儿子的基因型为 XᴬY，只有一条 X 染色体且为显性基因，不可能是携带者，故 C 错。
结论：A 选项错在遗传方式判断（应为伴 X 隐性而非常隐）；C 错在正常儿子 XᴬY 不携带致病基因；D 错在该病为隐性而非显性。故选 B。
4填空题
为培育耐寒且抗虫的工程化水稻新品系，某生物工程团队将耐寒基因CFP与抗虫基因Bt分别构建到两个独立的表达载体上，转化同一水稻细胞，并通过植物组织培养获得再生植株（T₀）。已知信息：①CFP基因整合到一对同源染色体中的一条上（相应位点记为A/a，含CFP基因为A，不含为a），Bt基因整合到另一对同源染色体中的一条上（相应位点记为B/b，含Bt基因为B，不含为b），两对基因独立遗传；②耐寒与抗虫均为完全显性，即只要含有A即耐寒，只要含有B即抗虫；③T₀植株自交获得T₁群体。请回答：
（1）T₀植株的基因型为________，表现为________（填“耐寒抗虫”“耐寒不抗虫”“不耐寒抗虫”或“不耐寒不抗虫”）。
（2）T₁群体中耐寒抗虫个体所占比例为________；其中能稳定遗传（自交后代不发生性状分离）的个体占T₁群体的比例为________。
（3）若从T₁中随机选取一株耐寒抗虫个体自交，其后代出现不耐寒不抗虫个体的概率为________。
答案：（1）AaBb；耐寒抗虫。
（2）T₀（AaBb）自交，A/a 与 B/b 独立遗传，逐对分析：Aa×Aa → 含A（耐寒）占 3/4；Bb×Bb → 含B（抗虫）占 3/4。两对相乘得耐寒抗虫（A_B_）占 3/4 × 3/4 = 9/16。
耐寒抗虫个体中能稳定遗传的为 AABB，占 T₁ 群体的 1/4 × 1/4 = 1/16。
（3）T₁ 耐寒抗虫个体的基因型及比例为 AABB∶AABb∶AaBB∶AaBb = 1∶2∶2∶4，共 9 份。
后代出现不耐寒不抗虫（aabb）要求亲本同时含 a 与 b，只有 AaBb（占 4/9）满足；AaBb 自交产生 aabb 的概率为 1/4 × 1/4 = 1/16。
故所求概率为 4/9 × 1/16 = 1/36。
解析：本题考查基因工程育种背景下的自由组合概率计算，核心是「先判显隐、再定基因型、最后逐对分析再相乘」。
（1）易错：把 T₀ 误写成 AaBb 的同时又误判性状；因 A、B 均为显性，含 A 含 B 即表现双显性。
（2）易错一：只算一对基因 3/4 而漏乘另一对；易错二：把「耐寒抗虫中能稳定遗传」误算成 1/9（那是耐寒抗虫内部的比例），题目问的是占 T₁ 群体的比例，应为 1/16。
（3）最易错处：直接用 1/16 作为答案，忽略了耐寒抗虫个体基因型不止 AaBb 一种，必须先按 1∶2∶2∶4 加权，再乘以各自自交产生 aabb 的概率（AABB、AABb、AaBB 自交均不产生 aabb），最终得 1/36。
5解答题
某科研团队用基因工程方法培育能产生药用蛋白 M 的转基因烟草，并对其后代进行遗传分析。已知信息：①目的基因 M 通过反转录法获取自药用真菌的 mRNA，构建表达载体后导入烟草细胞，M 基因整合到一对同源染色体中的一条上（相应位点记为 D/d，含 M 基因为 D，不含为 d），能产生 M 蛋白对不能产生为完全显性；②该烟草叶片是否被工程菌侵染后出现坏死斑，受另一对独立遗传的基因 E/e 控制，不出现坏死斑（抗坏死）对出现坏死斑为完全显性；③科研人员获得一株既能产生 M 蛋白又抗坏死的 T₀ 植株，让其自交得到 T₁，统计 480 株 T₁ 幼苗，其中既能产生 M 蛋白又抗坏死的有 270 株，能产生 M 蛋白但出现坏死斑的有 90 株，不能产生 M 蛋白但抗坏死的有 90 株，既不能产生 M 蛋白又出现坏死斑的有 30 株。请回答：
（1）由 T₁ 的性状分离比可判断，T₀ 植株的基因型为________，判断理由是________。
（2）T₁ 中能产生 M 蛋白的个体共________株；从中随机取一株自交，后代不发生性状分离（即后代全部能产生 M 蛋白）的概率为________。
（3）若要检测 T₁ 中某个体是否成功转入并整合了 M 基因，应在分子水平上采用________技术；若要检测 M 基因是否翻译出蛋白质 M，应采用________技术。
（4）为防止 M 基因通过花粉扩散到野生近缘种，可采取的一项具体措施是________。
答案：（1）DdEe。理由：T₁ 中「产M抗坏死∶产M坏死∶不产M抗坏死∶不产M坏死」= 270∶90∶90∶30 = 9∶3∶3∶1，符合两对独立遗传基因均为杂合子（DdEe）自交的典型分离比，说明 T₀ 对两对基因均为杂合。
（2）能产生 M 蛋白的个体数 = 270 + 90 = 360 株。
T₁ 中 D_ 的基因型及比例为 DD∶Dd = 1∶2（即 DD 占 1/3，Dd 占 2/3）；DD 自交后代全部产 M，Dd 自交后代有 1/4 不产 M，故所求概率 = 1/3 × 1 + 2/3 × 0 = 1/3。
（3）DNA 分子杂交技术；抗原—抗体杂交技术。
（4）将 M 基因导入叶绿体（或线粒体）基因组中（花粉中几乎不含叶绿体基因组，故不会随花粉传播）；或在 M 基因上游插入花粉（或绒毡层）特异性启动子使其在花粉中不表达；或对转基因植株进行雄性不育处理、花期隔离、去除雄蕊等（任答一项合理即可）。
解析：本题以基因工程育种与检测为情境，融合遗传概率计算与基因工程操作程序，突出推理与运算步骤。
（1）关键推理：9∶3∶3∶1 由 270∶90∶90∶30 化简而来，切忌直接看绝对株数而不化简；只有 DdEe 自交才出现 9∶3∶3∶1，若误判为 DDEe 或 DdEE 则分离比为 3∶1。
（2）易错一：只算 270 而漏掉「产M坏死」的 90 株，产 M 的应为 270 + 90 = 360；易错二：把「自交后代不分离」的概率误算为 2/3（Dd 的比例）或 1/2（Aa×Aa 后代 Aa 的比例），正确做法是先在 D_ 中按 1∶2 分出 DD 与 Dd，再加权，得 1/3。
（3）易错：混淆三个检测层次——检测是否插入用 DNA 分子杂交，检测是否转录用分子杂交（RNA 探针），检测是否翻译用抗原—抗体杂交；本题第 1 问是「是否整合」，第 2 问是「是否翻译出蛋白质」。
（4）考查防止基因漂移的具体措施，答「将目的基因导入叶绿体基因组」最典型；只写「加强管理」「注意安全」等笼统说法不得分。
6解答题
为探究某二倍体植物果实颜色与果形的遗传规律，科研人员用两个纯合品种进行杂交实验。已知信息：品种甲为红果圆果，品种乙为黄果长果；甲与乙杂交，F₁全部为红果圆果；F₁自交，F₂的表现型及个体数为：红果圆果 270 株、红果长果 90 株、黄果圆果 90 株、黄果长果 30 株。控制果实颜色的基因用 A/a 表示，控制果形的基因用 B/b 表示，两对基因位于非同源染色体上，且 F₂ 中各基因型的个体存活率相同。请回答下列问题：
（1）根据杂交结果判断，果实颜色与果形两对相对性状中的显性性状分别是________，判断的依据是________。
（2）写出亲本甲、乙和 F₁ 的基因型（用 A/a、B/b 表示）。
（3）F₂ 中红果圆果个体中，能稳定遗传（自交后代不发生性状分离）的个体所占比例为________。
（4）若让 F₁ 与黄果长果个体杂交，请写出该杂交的遗传图解（含亲本基因型、配子种类及比例、子代基因型与表现型及比例）。
（5）某同学欲从 F₂ 中选育能稳定遗传的红果长果植株，请简述从 F₂ 中筛选并鉴定该纯合植株的方案，并说明判断依据。
答案：（1）红果、圆果。依据：甲（红果圆果）与乙（黄果长果）杂交，F₁全部为红果圆果，即具有相对性状的纯合亲本杂交，F₁表现出的性状为显性性状（或：F₁自交，F₂中红果∶黄果 =（270+90）∶（90+30）= 360∶120 = 3∶1，圆果∶长果 =（270+90）∶（90+30）= 3∶1，故红果、圆果为显性）。
（2）甲：AABB；乙：aabb；F₁：AaBb。
（3）F₂ 中红果圆果（A_B_）占 9/16，其中能稳定遗传的纯合子 AABB 占 1/16，故在红果圆果个体中所占比例为（1/16）÷（9/16）= 1/9。
（4）遗传图解：
P：AaBb（红果圆果） × aabb（黄果长果）
配子：AB∶Ab∶aB∶ab = 1∶1∶1∶1 配子：ab
F₁（测交后代）：
AaBb（红果圆果）∶ Aabb（红果长果）∶ aaBb（黄果圆果）∶ aabb（黄果长果）= 1∶1∶1∶1。
（5）方案：从 F₂ 中选出红果长果植株（基因型为 A_bb），让其自交（或让同一植株连续自交）；观察并统计子代的表现型。判断依据：若自交后代全部为红果长果（不发生性状分离），则该植株为纯合子 AAbb，即为能稳定遗传的红果长果植株；若自交后代出现黄果长果（或红果∶黄果 = 3∶1），则该植株为杂合子 Aabb，不能稳定遗传，应淘汰。也可让该红果长果植株与黄果长果纯合子（aabb）测交，若后代全为红果长果则为 AAbb。
解析：（1）判断显隐性的关键：先看 F₁——具相对性状的纯合亲本杂交，F₁ 表现出来的即显性；再用 F₂ 分离比 3∶1 验证。易错：直接把亲本性状当显性，或只看 F₂ 某一组合而未验证比例。
（2）基因型确定的规范步骤：F₂ 表现型之比为 9∶3∶3∶1，说明 F₁ 为双杂合 AaBb 且两对基因独立遗传；亲本为纯合且表现型不同，故甲 AABB、乙 aabb。易错：把甲写成 AABb，或忽略「纯合」这一条件。
（3）概率计算的规范步骤：先分别算每对基因的概率再相乘。AaBb 自交，A_B_ 占 3/4 × 3/4 = 9/16，AABB 占 1/4 × 1/4 = 1/16，二者相除得 1/9。易错：①把「F₂ 中占 1/16」误当作答案，未除以红果圆果的比例；②漏乘——只算一对基因就下结论。
（4）遗传图解必须写全：亲本基因型与表现型、配子种类及比例、子代基因型与表现型及比例。测交后代比例为 1∶1∶1∶1。易错：漏写配子，或子代只写表现型不写基因型。
（5）选育纯合子的核心是「让其自交，看是否发生性状分离」。易错：只写「选红果长果」而不作鉴定；或误用杂合子自交后代出现性状分离就放弃筛选。
7解答题
某生物医药公司利用单克隆抗体技术开发一种检测作物病原体的试剂盒。研究人员将病原体的外壳蛋白作为抗原，多次注射到小鼠体内，随后取小鼠脾脏中的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞在聚乙二醇（PEG）诱导下融合。
已知信息：
（1）融合后的细胞混合物中，未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B淋巴细胞自身融合细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞以及杂交瘤细胞同时存在。
（2）B淋巴细胞在体外培养条件下不能无限增殖；骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT⁻），在含次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷（HAT）的选择培养基上不能存活；杂交瘤细胞既保留了骨髓瘤细胞无限增殖的特性，又获得了B淋巴细胞的HGPRT⁺，可在HAT培养基上存活。
（3）研究人员从HAT培养基上存活的细胞中随机挑选了120个细胞克隆进行抗体检测，结果如下：能分泌抗病原体外壳蛋白抗体的克隆有5个，能分泌其他无关抗体的克隆有23个，不分泌任何抗体的克隆有92个。
请回答下列问题：
（1）给小鼠多次注射病原体外壳蛋白的目的是什么？
（2）在HAT选择培养基上，未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、骨髓瘤细胞自身融合细胞均不能长期存活，请分别说明其不能存活的原因。
（3）第一次筛选得到的杂交瘤细胞并不都能分泌所需的特异性抗体，请结合上述检测结果说明原因，并指出第二次筛选（抗体检测）的必要性。
（4）若要获得既能无限增殖又能分泌抗病原体外壳蛋白特异性抗体的细胞株，应从上述120个克隆中选取哪一类？这类克隆占所检测克隆的比例是多少？
（5）将筛选得到的阳性克隆进行大规模培养，可从培养液中获取单克隆抗体。与从免疫血清中提取的常规抗体相比，单克隆抗体在用于该试剂盒时具有哪些突出优点？
答案：（1）刺激小鼠发生体液免疫（特异性免疫），使小鼠产生能分泌抗病原体外壳蛋白特异性抗体的B淋巴细胞（浆细胞）；多次注射可使免疫反应更强，获得更多相应的B淋巴细胞。
（2）①未融合的B淋巴细胞：虽具有HGPRT⁺，能在HAT培养基上存活一段时间，但不能无限增殖，培养一段时间后因细胞分裂停止而死亡；②未融合的骨髓瘤细胞：为HGPRT⁻，不能利用HAT培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷补救合成途径合成核酸，而氨基蝶呤又阻断了核酸的从头合成途径，故不能存活；③骨髓瘤细胞自身融合细胞：同样为HGPRT⁻，与未融合的骨髓瘤细胞一样不能在HAT培养基上存活。
（3）原因：小鼠经抗原免疫后，脾脏中存在多种B淋巴细胞，能产生多种不同的抗体（除抗病原体外壳蛋白抗体外，还有针对其他抗原决定簇的抗体）；B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合具有随机性，形成的杂交瘤细胞继承了不同B淋巴细胞产生不同抗体的特性，因此第一次筛选得到的杂交瘤细胞中，只有一部分能分泌所需的特异性抗体（本实验中为5/120）。
必要性：只有通过抗体检测（抗原—抗体杂交等特异性检测），才能从众多杂交瘤细胞中选出能分泌抗病原体外壳蛋白特异性抗体的阳性克隆，否则所得抗体不纯、特异性差，无法用于检测试剂盒。
（4）应选取「能分泌抗病原体外壳蛋白抗体」的那5个阳性克隆；其所占比例为 5 ÷ 120 × 100% ≈ 4.17%。
（5）单克隆抗体的优点：特异性强（只与病原体外壳蛋白特异性结合，不易出现交叉反应）；灵敏度高（微量抗原即可检出）；可大量制备（杂交瘤细胞可无限增殖，产量大、质量稳定、批间差异小）。
解析：本题考查单克隆抗体制备的两次筛选及概率计算，属中档偏上难度，突出推理与运算。
（1）易错点：只答「产生抗体」而不答「产生相应的B淋巴细胞」。注射抗原的直接目的是使小鼠发生免疫反应，获得能分泌特异性抗体的B淋巴细胞，而非直接获得抗体。
（2）易错点：混淆三种细胞的存活原理。未融合的B淋巴细胞是「不能无限增殖」而亡，未融合的骨髓瘤细胞及其自身融合细胞是「HGPRT⁻，在HAT培养基上不能存活」，二者原因完全不同，不能混答。
（3）易错点：误认为「所有杂交瘤细胞都能产生所需抗体」。杂交瘤细胞只保证「既能无限增殖又能产生抗体」，但产生哪种抗体取决于融合的B淋巴细胞种类，故必须进行第二次抗体检测筛选。
（4）易错点：概率计算漏乘或误用比例。此处为简单比例计算 5 ÷ 120 ≈ 4.17%，需写明分子分母含义，避免误用 5 ÷ 120 以外的数据（如 5 ÷ 28）。
（5）易错点：只写「产量大」而不写「特异性强、灵敏度高」，未体现单克隆抗体「单克隆」（单一克隆、均一抗体）的本质优势。
作答规范：涉及筛选时务必区分「第一次筛选（HAT选择培养基筛选杂交瘤细胞）」与「第二次筛选（抗体检测筛选阳性克隆）」的原理、对象与结果。
8解答题
某科研团队用限制酶和DNA连接酶构建重组质粒，用于生产一种药用蛋白。已知信息：
（1）含目的基因的DNA片段两端及质粒上的多克隆位点中，存在三种限制酶识别序列，其识别序列与切割位点如下（箭头表示切割位点，识别序列均为回文序列，切割后产生粘性末端）：
EcoRⅠ：5'—G↓AATTC—3'，切割后产生 5'—AATTC—3' 的粘性末端；
BamHⅠ：5'—G↓GATCC—3'，切割后产生 5'—GATC—3' 的粘性末端；
HindⅢ：5'—A↓AGCTT—3'，切割后产生 5'—AGCT—3' 的粘性末端。
（2）目的基因所在的DNA片段上，EcoRⅠ位点位于目的基因的上游（5'端一侧），HindⅢ位点位于目的基因的下游（3'端一侧）；质粒的多克隆位点中，EcoRⅠ位点在前、HindⅢ位点在后，二者之间是启动子方向确定的插入区。
（3）若只用BamHⅠ一种酶切割，目的基因两端与质粒切口均产生相同的GATC粘性末端。
请回答下列问题：
（1）若要使目的基因定向插入质粒（即保证目的基因与质粒启动子方向一致），应选用哪两种限制酶同时切割含目的基因的DNA片段和质粒？请说明理由。
（2）若改用BamHⅠ一种酶同时切割含目的基因的DNA片段和质粒，构建的重组质粒中目的基因插入方向有几种可能？其中目的基因方向正确的比例是多少（不考虑多个目的基因串联插入的情况）？
（3）限制酶切割的是DNA分子中的哪种化学键？DNA连接酶连接目的基因与质粒切口时形成的是哪种化学键？
（4）研究人员用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切构建重组质粒后，将其导入大肠杆菌，需在培养基中加入相应抗生素进行筛选。请说明能长出的菌落为何还需进一步鉴定（如PCR或酶切鉴定），才能确认为目的基因正确插入的重组质粒。
答案：（1）应选用 EcoRⅠ 和 HindⅢ 两种限制酶同时切割。
理由：EcoRⅠ切割产生AATTC粘性末端，HindⅢ切割产生AGCT粘性末端，两种粘性末端的碱基序列不同、不互补，因此目的基因两端的末端只能分别与质粒上对应酶切位点的末端互补连接，从而保证目的基因以唯一方向插入质粒，与启动子方向一致（定向克隆），同时避免质粒自身环化。
（2）若只用BamHⅠ一种酶切割，目的基因两端与质粒切口均产生相同的GATC粘性末端，连接时目的基因可以正向插入，也可以反向插入，因此插入方向有 2 种可能。
由于两种方向出现的概率相等，故目的基因方向正确的比例为 1 ÷ 2 × 100% = 50%。
（3）限制酶切割的是DNA分子中每条链上脱氧核糖与磷酸之间的磷酸二酯键（注意：不是碱基对之间的氢键，氢键在解旋时断裂）；DNA连接酶连接目的基因与质粒切口时，形成的也是磷酸二酯键。
（4）原因：抗生素筛选只能证明质粒（含抗性基因）已导入受体细胞，不能证明：①质粒是否为重组质粒（可能为未插入目的基因的空质粒自身环化产物）；②目的基因插入方向是否正确；③目的基因是否完整、未发生突变或缺失。
因此需进一步用PCR（目的基因特异性引物扩增）或限制酶切后电泳（检测片段大小）等方法鉴定，确认目的基因完整、方向正确地插入了重组质粒，才能用于药用蛋白生产。
解析：本题考查重组DNA技术的基本工具（限制酶、DNA连接酶）与定向克隆、方向概率计算，属中档偏上难度，突出推理与运算步骤。
（1）易错点：答成「EcoRⅠ和BamHⅠ」或只用一种酶。定向插入必须选用产生不同粘性末端的两种酶（此处EcoRⅠ与HindⅢ），使目的基因两端末端不同、质粒两端切口不同，从而只能以一种方向连接；若两末端相同则可正可反。
（2）易错点：概率计算漏乘或误答「1种」。两端粘性末端相同时，插入方向有2种等可能情况，正确方向概率为 1/2（50%），须明确写出 2 与 1/2 两个数值，缺一不可。
（3）易错点：混淆「磷酸二酯键」与「氢键」。限制酶和DNA连接酶均作用于磷酸二酯键，氢键是碱基互补配对形成的，解旋酶或高温（PCR变性）才破坏氢键。
（4）易错点：误认为「能在抗生素培养基上长出即为重组质粒成功导入目的基因」。抗生素筛选只筛「质粒导入」，不筛「目的基因正确插入」，需再经PCR或酶切鉴定。
作答规范：涉及方向概率时，先判断两端末端是否相同，再列举可能方向，最后计算比例，步骤完整可避免漏乘漏答。